D-二聚體檢測方法和檢測標(biāo)準(zhǔn)

D-二聚體是交聯(lián)纖維蛋白降解后形成的纖維蛋白降解產(chǎn)物中最小的片段，其含量增高反映了體內(nèi)高凝血狀態(tài)和繼發(fā)纖溶活性增強(qiáng)。D-二聚體含量檢測對于原發(fā)性和繼發(fā)性纖溶鑒別以及溶栓治療監(jiān)測方面具有重要價值。目前D-二聚體檢測方法也比較多樣化，包括酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)（ELISA）、膠乳凝集免疫比濁法、免疫金標(biāo)法等等，每種方法都有各自特點(diǎn)，總體來看，敏感性較高，但特異性不一。本文主要對D-二聚體的不同檢測方法進(jìn)行介紹，并總結(jié)了每種方法的特點(diǎn)。

D-二聚體檢測方法

酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)（ELISA）

ELISA檢測主要基于雙抗夾心法，關(guān)鍵需要找到一對配對抗體。將一株D-二聚體單抗包被于聚丙乙烯塑料板，另一株單抗用辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記。將待測樣品加入板孔中，待測物中的抗原會與板孔中包被的抗體結(jié)合，在加入酶標(biāo)抗體后形成包被抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，最后加入底物顯色。最終根據(jù)吸光度判定樣品中抗原的量，抗原量與吸光度值成正比。

ELISA檢測方法具有靈敏度高、定量準(zhǔn)確等特點(diǎn)，但操作步驟較多，比較繁瑣，整個過程消耗時間長，而且影響因素較多，所以不適合急診使用。

膠乳凝集法

經(jīng)典的膠乳凝集法是將被檢血漿中D-二聚體或FDP與包被在膠乳顆粒上的單克隆抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng)，進(jìn)行定性或半定量測定。

膠乳凝集法操作簡便、快速、經(jīng)濟(jì)，適用于床旁檢測，常作為篩查試驗(yàn)用。為定性試驗(yàn)，半定量時費(fèi)試劑，結(jié)果判斷有主觀差異，敏感性低于ELISA。

免疫金標(biāo)法

將抗D-二聚體單克隆抗體吸附在多孔薄膜并粘放在有多層吸收墊的塑料盤上，被檢標(biāo)本加入后即與該單抗結(jié)合，然后加入膠體金標(biāo)記的抗體，形成抗體-抗原-金標(biāo)抗體復(fù)合物，在薄膜上產(chǎn)生紅色的斑點(diǎn)。通過肉眼觀察或用折射儀讀數(shù)，紅色強(qiáng)度與血漿中抗原含量成比例。

此方法具有膠乳凝集法簡單、快速，適用于急診測定的優(yōu)點(diǎn)，又具有ELISA能夠準(zhǔn)確定量的特點(diǎn)。但易受白細(xì)胞、血小板、類風(fēng)濕因子、肝素及血脂等物質(zhì)的干擾，特異性不強(qiáng)，在不同報(bào)道中其敏感性和陰性預(yù)測值差別較大。

膠乳增強(qiáng)型免疫比濁

膠乳增強(qiáng)免疫比濁法是樣本中抗原與包被在膠乳顆粒上的單克隆抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，在一定的緩沖體系中產(chǎn)生凝集而導(dǎo)致濁度增大，濁度的變化與抗原濃度成正比。

此方法具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確定量、敏感度高等優(yōu)點(diǎn)，可滿足急診需要，在臨床研究中應(yīng)用越來越廣泛。但需要專門儀器測定，成本較高。

隨著技術(shù)的發(fā)展，D-二聚體測定的方法也更加多樣化。對臨床而言，既希望測定結(jié)果準(zhǔn)確，又需要測定簡便快速，如此才更有利于患者的及時診斷和治療。但實(shí)際上，每種檢測方法都有自身的優(yōu)缺點(diǎn)，根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的方法，免疫金標(biāo)法、膠乳增強(qiáng)型免疫比濁等都比較適合急診使用。

D-dimer檢測標(biāo)準(zhǔn)

無統(tǒng)一的國際標(biāo)準(zhǔn)
目前有超過30多種檢測方法和20多種單抗被使用
存在兩種報(bào)告單位：D-二聚體（DDU）和纖維蛋白原當(dāng)量（FEU）
抗體對D-二聚體不同片段有不同的親和力
不同的試劑有不同的干擾情況

D-二聚體試劑標(biāo)準(zhǔn)（中國國家標(biāo)準(zhǔn)討論稿）

陰性預(yù)測值

結(jié)合臨床診斷的驗(yàn)前概率進(jìn)行D-二聚體檢測，其陰性預(yù)測值不應(yīng)低于95%。

測試范圍

涵蓋制造商提供的用于排除診斷的臨界值1/2到4倍的臨床標(biāo)本測定值。

線性

D-二聚體試劑在測試范圍內(nèi)，線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.98。

重復(fù)性

用正常質(zhì)控血漿日內(nèi)重復(fù)測試所得的變異系數(shù)（CV）不超過15%，用高值異常質(zhì)控血漿同日內(nèi)重復(fù)測試所得結(jié)果的變異系數(shù)（CV）不超過10%。

D-二聚體檢測方法和檢測標(biāo)準(zhǔn)