膠乳增強(qiáng)比濁法的簡介及常見問題解決方法

1. 膠乳比濁法的定義、原理和分類

膠乳增強(qiáng)比濁法是目前比濁試驗(yàn)中應(yīng)用范圍最廣、最多的方法。當(dāng)待測抗體遇到相應(yīng)的抗原時(shí)，會發(fā)生聚集，形成濁度。膠乳增強(qiáng)比濁法則是針對復(fù)合物過少無法形成濁度的問題，衍生出一種方法，原理是將抗體吸附在直徑為60-300nm，甚至是300nm以上的微球顆粒上，增加抗原抗體的免疫復(fù)合物，從而增大信號形成濁度。通過光強(qiáng)度的變化即可計(jì)算出待測標(biāo)本中抗原的含量（始終保持抗體過量）。膠乳增強(qiáng)比濁法根據(jù)檢測方法的不同可分為透射增強(qiáng)比濁法和散射增強(qiáng)比濁法，透射增強(qiáng)比濁法是根據(jù)光線透過渾濁介質(zhì)時(shí)，光線被吸收和反射的量來計(jì)算抗原的量，光減少的量與抗原的量成正比；散射膠乳比濁法則是一定波長的光線沿水平軸照射，通過渾濁溶液，光線發(fā)生折射，光線偏轉(zhuǎn)的角度與復(fù)合物的含量成正比。

2. 膠乳增強(qiáng)比濁法常見的問題

問題1 蛋白無法吸附在微球上。

解決方法：加入更多的蛋白；去除微球中的表面活性劑，釋放其占據(jù)的蛋白結(jié)合位點(diǎn)；引入中間物，將微球與蛋白相連；改變緩沖劑。

問題2 標(biāo)記時(shí)加入大量的蛋白，但是仍然無活性。

解決方法：改變蛋白的加入量，從而改變蛋白與微球結(jié)合的空間構(gòu)象；使用表位稀釋物，占據(jù)微球上的部分蛋白結(jié)合位點(diǎn)，防止蛋白靠的太近。

問題3 清洗去除未吸附蛋白后，微球聚集。

解決方法：增加蛋白標(biāo)記量或封閉劑的用量，防止有空余位。

問題4 標(biāo)記后開始活性很好，儲存一段時(shí)間后，活性降低。

解決方法：降低儲存溫度到2~8度；降低儲存液的封閉劑濃度，防止抗體被替換；確認(rèn)儲存液中無能與抗體競爭的雜質(zhì)，防止長時(shí)間取代抗體，嘗試使用其他緩沖劑，調(diào)試PH；加入乳膠保護(hù)劑等。

問題5 PS微球與蛋白（抗體）交聯(lián)后，當(dāng)時(shí)沒有發(fā)現(xiàn)凝集，但隔夜后發(fā)現(xiàn)有凝集。

解決方法：可以加一些緩沖液解決，常見的是BSA；也可以提高微球的交聯(lián)率。

問題6 EDC活化羧基乳膠微球后，加蛋白（抗體）即時(shí)有沉淀出現(xiàn)。

解決方法：換質(zhì)量好的EDC；適當(dāng)?shù)恼{(diào)低緩沖液的PH值；減少EDC用量和調(diào)整活化時(shí)間。

參考文獻(xiàn)

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