胃蛋白酶原（PG）的定量檢測方法
胃蛋白酶原（PG）是一種胃蛋白酶非活性前體，包含PGⅠ和PGⅡ兩個亞群。人體血清胃蛋白酶原的含量變化可反應(yīng)胃粘膜的功能情況。血清PGⅠ和PGⅠ/PGⅡ（PGR）值下降是臨床早期胃癌篩選的有效指標(biāo)。除了PG水平，臨床上還需結(jié)合患者體內(nèi)G17水平、幽門螺桿菌（HP）水平以及胃鏡活檢等其他檢測結(jié)果才能做出準(zhǔn)確的診斷。胃蛋白酶原的臨床定量檢測方法較多，目前主要有流式熒光發(fā)光免疫微球、時間分辨熒光免疫、乳膠增強免疫比濁、化學(xué)發(fā)光免疫分析、酶聯(lián)免疫吸附以及放射免疫分析等方法。
原理簡介
1. 流式熒光發(fā)光免疫微球分析技術(shù)（Flow fluorenscence immunmicrobeads assay, FFIA）
該技術(shù)以熒光編碼微球和雙激光流式檢測技術(shù)為核心，通過熒光標(biāo)記PG抗體溶液，加入檢測樣本，再加入交聯(lián)特異性捕獲抗體的熒光編碼微球懸液，形成夾心復(fù)合物（交聯(lián)捕獲抗體的編碼微球-PG抗原-熒光標(biāo)記PG抗體復(fù)合物）。復(fù)合物被鞘液隔開逐一通過激光檢測，通過不同的激光通道分別識別出編碼的微球和熒光標(biāo)記PG抗體。編碼微球上的標(biāo)記抗體熒光值與樣本中的PG抗原呈正比，再通過相應(yīng)的校準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出相應(yīng)的樣本PG含量。
2. 時間分辨熒光免疫分析（Time-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA）
在熒光分析的基礎(chǔ)上發(fā)展而來。利用鑭系元素?zé)晒鈮勖L的特點，根據(jù)波長和時間進行信號分辨，有效排除非特異性熒光。采用鑭系元素標(biāo)記胃蛋白酶原抗原；與檢測樣本發(fā)生免疫反應(yīng)，最后檢測熒光強度來判定樣品中抗原的水平。
3. 乳膠增強免疫比濁（Particle enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA）
由免疫比濁的方法發(fā)展而來，分為散射比濁和透射比濁兩種檢測法。其原理相似，都是將單克隆PG抗體交聯(lián)到膠乳顆粒表面；加入檢測樣本，發(fā)生免疫反應(yīng)，生成抗原-抗體-膠乳顆粒復(fù)合物；反應(yīng)液的散光性或透光性能改變，其濁度變化程度與樣本中的胃蛋白酶原抗原濃度呈正相關(guān)。
4. 化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay, CLIA）
此方法原理是用發(fā)光物質(zhì)或酶標(biāo)記PG抗體，與樣本中的胃蛋白酶原抗原反生免疫反應(yīng)后，加入氧化劑或者酶底物而發(fā)光，通過檢測發(fā)光強度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線判定樣本中PG抗原濃度。其標(biāo)記物主要有化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、酶標(biāo)記兩類；常用標(biāo)記物分別為吖啶酯類化合物（AE）和辣根過氧化物酶(HRP)。
5. 酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）
常用的反應(yīng)方式有雙抗夾心、競爭、間接、直接ELISA。其原理用酶標(biāo)記的抗體或者抗原指示免疫反應(yīng)，先將已知的抗原或抗體包被在固相載體表面，使免疫反應(yīng)在固定相上進行。通過酶底物顯色反應(yīng)判定是否存在免疫反應(yīng)，根據(jù)顏色深淺進行半定量，目前常用標(biāo)記物為HRP。
6. 放射免疫分析（Radioimmunoassay, RIA）
主要原理是競爭性抑制，利用放射性核素標(biāo)記提純的PG抗原，待測樣本中的PG抗原與標(biāo)記PG抗原共同與定量的PG抗體結(jié)合。反應(yīng)平衡后，通過測定放射性強度，求得未標(biāo)記的樣本PG抗原含量。
檢測方法比較
如表1所示，放射免疫分析由于其示蹤物質(zhì)具有放射性，所以應(yīng)用受限，普適性差。ELISA成本低，可進行定性和半定量，適用于基層醫(yī)院。近年來乳膠增強免疫比濁、化學(xué)發(fā)光免疫分析應(yīng)用廣泛，這兩種方法成本相對較低，靈敏度高于ELISA，適用于大、中型醫(yī)院。流式熒光發(fā)光免疫微球和時間分辨熒光免疫分析靈敏度高，但成本高，檢測需要配備昂貴的儀器，適用于有條件的醫(yī)院。
表1 檢測方法比較
| 檢測方法 | 優(yōu)點 | 缺點 |
|---|---|---|
| FFIA | 靈敏度較高，可同時檢測多個指標(biāo)，檢測效率高，可進行高通量檢測。 | 顯色本底高，定量分析范圍受限。 |
| PCT | 早期嚴(yán)重全身性細(xì)菌感染。 | 局部感染和慢性感染。 |
| TRFIA | 示蹤物穩(wěn)定，靈敏度較高，適用于超微量分析，定量分析量程寬，可排除非特異性熒光。 | 成本高，需要昂貴的檢測儀器；超微量分析時易受激發(fā)光的雜散光影響。 |
| PETIA | 穩(wěn)定性好，成本相對低，普通生化分析儀即可檢測。 | 靈敏度較低。 |
| CLIA | 抗干擾能力強，成本相對較低。 | 檢測速度慢。 |
| ELISA | 成本低，適用于定性檢測。 | 適用于半定量。 |
| RIA | 靈敏度高，適于微量分析。 | 具有放射性，會對人體或環(huán)境造成污染；且不穩(wěn)定，效期短不易保存，重復(fù)性差，不能廣泛應(yīng)用。 |
參考文獻
[1] 何忠發(fā), 駱安德, 盧彥蕙等. 胃蛋白酶原的定量檢測方法及臨床應(yīng)用的研究進展[J]. 廣西醫(yī)學(xué), 2016, 38(3): 398-401.
[2] 黃飚, 肖華龍, 張祥瑞等.胃蛋白酶原Ⅰ時間分辨熒光免疫分析法的建立[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志, 2004, 24(6): 492-495.
[3] 周偉, 金磊, 孟偉等. 胃蛋白酶原激光化學(xué)發(fā)光免疫測定方法的建立[J].中國醫(yī)藥指南, 2013, 11(12): 64-66.
[4] Mertz HR, Peterson WL, Walsh JH. ”Familial hyperpepsino genemia”and Helicobacter priori infection[J]. Am J Gas troenterol, 2000, 95(4): 943-946.
[5] 趙建業(yè)、朱春平, 李兆申. 血清胃蛋白酶原、胃泌素-17、幽門螺桿菌抗體檢測對萎縮性胃炎和胃癌的診斷價值[J]. 胃腸病學(xué), 2016, 21(6): 376-379.
[6] Hemaila I, DakubuS, Mukkala VM, et al. Europium as a label in time-resolved immunofluorometric assay. Anal Biochem, 1984, 137: 335-338.
[7] 朱國民, 邱峰. 三種血清胃蛋白酶原檢測方法在胃癌篩查中的比較分析[J]. 檢驗醫(yī)學(xué), 2012, 27(11): 961-962.
[8] 陶偉, 李亞俊, 楊力. 慢性胃炎、胃潰瘍及胃癌患者血清胃蛋白酶原水平的研究[J]. 寧廈醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2011, 33(11):1054-1057.
[9] 李萌, 吳詩琴. 兩種胃蛋白酶原檢測方法比較及偏倚評估[J]. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 36(18):2706-2710.
[10] 楊瑞生, 韓正大, 馬芬等. 胃癌篩查時血清胃蛋白酶原4種檢測方法的比較分析[J]. 中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新, 2012, 9(6): 78-79.
[11] 李方和,龔勁松. 流式熒光免疫微球分析技術(shù)的原理與特征[J].咸寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2001,15(1):73-76.
相關(guān)產(chǎn)品
蘇公網(wǎng)安備32011202001302